Основни совети за криопрезервација на клеточните култури

Основни совети за криопрезервација на клеточните култури

Клетките го продолжуваат својот метаболизам за време на нормални активности за раст, што бара учество на разни протеази. Кога температурата паѓа под -70 ° C, протеазите престануваат да работат. Затоа, во околина со екстремно ниски температури, клетките можат да ги запрат своите метаболички активности и да влезат во заспана состојба што овозможува долгорочно складирање.

1. Експериментални материјали

Основен материјал:

Основен медиум за култура

Серум (конвенционален FBS/NBS)

Работна маса со ултрапура

Стерилен диметил сулфоксид (DMSO)

Раствор на сол со сол на стерилен PBS фосфат тампон

Пиштол за пипетирање

Електричен пиштол за пипетирање

Подготовка на експериментите

а) Подготовка на растворот за замрзнување:

Општи клетки: 55% базален медиум + 40% серум на говеда (FBS/NBS) + 5% DMSO

Витални клетки: 90% серум на говеда (FBS/NBS) + 10% DMSO

Подгответе го подготвениот раствор за криопрезервација во цевка од центрифуга од 15 ml [гнездо] и чувајте на 4 ° C за подоцнежна употреба.

(б) Подготовка на клетки да бидат замрзнати:

Пред замрзнување на клетките, изберете клетки со добар статус на раст и во логаритамска фаза на раст и заменете ги со свеж среден 12-24 часа пред замрзнување за да ја одржите состојбата на клетките.

2. Експериментална постапка

1. Набудувајте ја густината на клетките да бидат замрзнати, што е околу 80%~ 90%. Користете пиштол за пипета за да го аспирирате стариот медиум, да додадете стерилен PBS за да ги измиете клетките 1-2 пати и да го извадите преостанатиот медиум во околината на културата.

2. Додадете соодветна количина на трипсин или дигестивен сок за да му овозможите на трипсинот да влезе во клетките и ставете ги во инкубаторот за варење. Набудувајте ја состојбата на клетките под микроскопот: цитоплазмата се повлекува и клетките повеќе не се поврзани во чаршафи. Во овој момент, додадете го решението за стоп за да го запрете процесот на варење.

3. Нежно меур на клетките со врв за да формираат суспензија на клетките и да ја центрифугираат суспензијата на клетките на 1000 вртежи во минута за 3-5 минути.

Отфрлете го супернатантот, додадете соодветна количина на раствор за замрзнување и нежно пипета за да ги направите клетките да сметаат рамномерно. Прилагодете ја густината на клетката со медиум за криопрезервација за да ја направите конечната густина 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Користете пиштол за пипета за да ги одделите криогените цевки според очекуваниот капацитет и користете автоматска машина за покривање за капа и запечати.

5. Стандардната програма за криопрезервација е стапка на ладење од -1 ° C до -2 ° C/min, а клетките што треба да се замрзнат може постепено да се замрзнуваат според следниве чекори: собна температура → 4 ° C (20мин) → - - - - - - - - - - - -20 мин) → - - - - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (преку ноќ) → Долгорочно складирање во течен азот.

Исто така, може да се чува директно во замрзнувач на -80 ° C во текот на ноќта, а потоа да се пренесе во течен азот за складирање.

Yongyue Medical е високо-технолошко претпријатие специјализирано за R&D, производство и продажба на биомедицински потрошни материјали. Совети за пипета, пипети, ПЦР плоча, производи за култура на клетки и други потрошни материјали за биолошка лабораторија. Yongyue Medical е достоен за вашата доверба и избор! Добредојдовте да се консултирате!